การย้อมสีอิมมูโนฮิสโตเคมี (IHC) คืออะไร? ความหมายในการวินิจฉัยเนื้องอก

ภูมิคุ้มกันถาม-ตอบคณะที่ปรึกษาสัตวแพทย์ Meongsiljang

การย้อมสีอิมมูโนฮิสโตเคมี (IHC) คือการตรวจพยาธิวิทยาที่แม่นยำ โดยทำเครื่องหมายโปรตีนเฉพาะในเนื้อเยื่อด้วยแอนติบอดี เพื่อระบุตัวตนและที่มาของเนื้องอกได้อย่างถูกต้อง มีบทบาทสำคัญในการกำหนดชนิดของเนื้องอก ระดับความร้ายแรง และแนวทางการรักษา เมื่อการตรวจชิ้นเนื้อทั่วไปแยกแยะได้ยาก

การย้อมสีอิมมูโนฮิสโตเคมี (IHC) คืออะไร?

พยาธิแพทย์สัตว์กำลังวิเคราะห์สไลด์การย้อมสีอิมมูโนฮิสโตเคมีด้วยกล้องจุลทรรศน์

การย้อมสีอิมมูโนฮิสโตเคมี (Immunohistochemistry, IHC) คือการตรวจพยาธิวิทยาที่แม่นยำ เพื่อเปิดเผยตัวตนของเซลล์เนื้องอก โดยการทำให้สีติดกับโปรตีนเฉพาะในเนื้อเยื่อผ่านการจับของแอนติบอดี การจำแนกเนื้องอกที่ถูกต้องคือหัวใจสำคัญ เมื่อการตรวจชิ้นเนื้อทั่วไป (H&E) สามารถบอกได้เพียงว่า "สงสัยว่าเป็นมะเร็ง" การเพิ่มการตรวจ IHC จะช่วยระบุได้ว่าเนื้องอกเริ่มต้นจากเซลล์ใด ระดับความร้ายแรงเป็นอย่างไร และควรใช้การรักษาแบบใด

ทำไมการตรวจชิ้นเนื้อทั่วไปจึงไม่เพียงพอ?

การตรวจชิ้นเนื้อทั่วไปพิจารณาเพียงรูปร่างและการเรียงตัวของเซลล์ แต่เนื้องอกที่มีลักษณะคล้ายกันอาจมีต้นกำเนิดที่แตกต่างกันโดยสิ้นเชิง ตัวอย่างเช่น มะเร็งต่อมน้ำเหลือง มะเร็งเซลล์มาสต์ และฮิสทีโอไซโตมา ล้วนปรากฏเป็นเซลล์ทรงกลม ทำให้การแยกแยะด้วยการย้อมสี H&E เพียงอย่างเดียวทำได้ยากในหลายกรณี IHC จะค้นหาโปรตีน (เครื่องหมาย) ที่มีเฉพาะในเซลล์แต่ละชนิด ดังนั้นแม้จะเป็นเซลล์ทรงกลมเหมือนกัน IHC ก็บอกได้อย่างแม่นยำว่ามาจากสายพันธุ์ของเซลล์ภูมิคุ้มกันใด การจำแนกที่ถูกต้องจึงสำคัญมาก เพราะวิธีการรักษาและพยากรณ์โรคจะแตกต่างกันอย่างสิ้นเชิง

การย้อมสี IHC ดำเนินการอย่างไร?

ตัดตัวอย่างเนื้อเยื่อให้บางแล้ววางบนสไลด์ จากนั้นหยดแอนติบอดีปฐมภูมิที่จับกับโปรตีน (แอนติเจน) ที่ต้องการหา เมื่อติดแอนติบอดีทุติยภูมิที่มีสี กล้องจุลทรรศน์จะแสดงการเปลี่ยนแปลงสีที่ตำแหน่งที่แอนติบอดีจับ ทำให้เห็นเครื่องหมาย เนื่องจากมีสีติดเฉพาะตำแหน่งที่มีโปรตีน จึงสามารถตรวจสอบได้ทันทีว่าเซลล์ใดแสดงโปรตีนใด เซลล์เนื้องอกอาจแบ่งปันเครื่องหมายร่วมกัน ดังนั้นโดยทั่วไปจึงอ่านผลโดยนำเครื่องหมายหลายตัวมารวมเป็นแผง (panel) แทนการดูเครื่องหมายเดียว

ภาพประกอบหลักการย้อมสี IHC ที่เกิดสีจากการจับกันของแอนติเจน-แอนติบอดี

เครื่องหมาย IHC หลักและความหมายในการวินิจฉัย

รายการ	ความหมายเมื่อเป็นบวก	เนื้องอกที่ใช้บ่อย
CD3	ไลมาโฟมาสายเซลล์ T	ไลมาโฟมาเซลล์ T
CD20 / CD79a	ไลมาโฟมาสายเซลล์ B	ไลมาโฟมาเซลล์ B
c-KIT (CD117)	ต้นกำเนิดเซลล์มาสต์ ประเมินความเป็นไปได้ในการแพร่กระจายและพยากรณ์โรคจากรูปแบบการย้อมสี	มะเร็งเซลล์มาสต์
Ki-67	อัตราการเติบโตของเซลล์ (ระดับความร้ายแรง)	การประเมินพยากรณ์โรคของเนื้องอกเกือบทุกชนิด
Melan-A	ต้นกำเนิดเซลล์เมลานิน	มะเร็งผิวหนัง
Vimentin	เซลล์เนื้อเยื่อเกี่ยวพัน (สงสัยซาร์โคมา)	ซาร์โคมาเนื้อเยื่ออ่อน

ชนิดของเครื่องหมายและเกณฑ์การเป็นบวกอาจแตกต่างกันไปตามสถาบันตรวจและชนิดของเนื้องอก

สถานการณ์ใดที่แนะนำให้ทำการตรวจ IHC?

ตามตำราพยาธิวิทยาสัตว์ แนะนำให้ทำการตรวจ IHC อย่างแข็งขันในสถานการณ์ต่อไปนี้

การแยกเนื้องอกเซลล์ทรงกลม: เมื่อสับสนระหว่าง มะเร็งต่อมน้ำเหลือง มะเร็งเซลล์มาสต์ และเนื้องอกพลาสมาเซลล์

การจำแนกประเภทภูมิคุ้มกันของไลมาโฟมา: ระบุว่าเป็นเซลล์ T หรือเซลล์ B เพื่อตัดสินใจยาและพยากรณ์โรค

การประเมินระดับความร้ายแรง (Grade): ประเมินอัตราการเติบโตด้วยเครื่องหมายการเติบโต เช่น Ki-67 และดัชนีการแบ่งตัว (mitotic index)

การติดตามต้นกำเนิดของมะเร็งแพร่กระจาย: ค้นหาเบาะแสว่าเนื้องอกที่แพร่กระจายเริ่มจากที่ไหน

การอ้างอิงพยากรณ์โรคและแนวทางการรักษา: มะเร็งเซลล์มาสต์ที่เป็นบวกต่อ c-KIT(CD117) จะประเมินความเป็นไปได้ในการแพร่กระจายและพยากรณ์โรคจากรูปแบบการย้อมสี c-KIT และนำมาใช้อ้างอิงในการกำหนดแนวทางการรักษา

สิ่งที่ต้องทราบเมื่อตีความผล IHC

ผล IHC มักจะไม่ออกมาอย่างเรียบง่ายว่า "บวก/ลบ" เครื่องหมายแต่ละตัวจะแบ่งระดับเป็น "บวกแรง บวกอ่อน บวกบางส่วน" และไม่ได้ยืนยันการวินิจฉัยด้วยเครื่องหมายเดียว โดยปกติจะอ่านผลเป็นแผงโดยรวมเครื่องหมายหลายตัว และวินิจฉัยสุดท้ายจะพิจารณาจากผล H&E ข้อมูลทางคลินิก และการตรวจภาพ หากในใบผลมีคำว่า "สอดคล้องกับ..." หรือ "บ่งชี้ว่า..." หมายความว่าไม่ใช่การยืนยัน 100% จึงควรปรึกษาสัตวแพทย์เจ้าของไข้ให้เพียงพอ

ค่าใช้จ่ายและระยะเวลาในการตรวจ

การตรวจ IHC ใช้เวลาและค่าใช้จ่ายมากกว่าการตรวจชิ้นเนื้อทั่วไป เนื่องจากมีค่าใช้จ่ายเพิ่มเติมต่อเครื่องหมาย 1 ตัว และโดยปกติจะดำเนินการเป็นชุด 2-5 ตัว จึงมีโครงสร้างค่าใช้จ่ายเพิ่มเติมบนการตรวจชิ้นเนื้อทั่วไป ราคาต่อหน่วยแตกต่างกันไปตามสถาบันตรวจ จึงควรตรวจสอบค่าใช้จ่ายที่คาดการณ์ไว้ล่วงหน้าเมื่อคลินิกสัตว์รับใบส่งตรวจภายนอก ผลลัพธ์โดยปกติใช้เวลาประมาณ 7-14 วันตามเกณฑ์การส่งตรวจภายนอก และอาจนานขึ้นหากต้องการเครื่องหมายเพิ่มเติม

ฉากในห้องตรวจที่สัตวแพทย์อธิบายผลการตรวจ IHC ให้เจ้าของฟัง

จุดที่เจ้าของต้องตรวจสอบในใบผล

ใบผล IHC มีศัพท์ทางการแพทย์มากจึงเข้าใจยาก แต่มีรายการที่เจ้าของต้องตรวจสอบให้แน่ใจ

ชื่อการวินิจฉัยสุดท้าย: ชื่อที่ถูกต้องของเนื้องอกและระดับ (Grade)

ภูมิคุ้มกันฟีโนไทป์: ต้นกำเนิดของเซลล์ เช่น เซลล์ B เซลล์ T

ดัชนี Ki-67: อัตราการเติบโต (ยิ่งต่ำยิ่งมีแนวโน้มเติบโตช้า)

ความคิดเห็นเกี่ยวกับพยากรณ์โรค: ข้อสังเกตทางพยาธิวิทยา เช่น "พยากรณ์โรคดี/ควรระวัง/ไม่ดี"

เครื่องหมายการรักษามุ่งเป้าและพยากรณ์โรค: สถานะบวกของ c-KIT(CD117) เป็นต้น

หากไม่เข้าใจรายการใด ต้องขอคำอธิบายเพิ่มเติมจากสัตวแพทย์เจ้าของไข้เสมอ

สำหรับแมวมีสิ่งที่ต้องตรวจสอบเพิ่มเติม

มะเร็งต่อมน้ำเหลืองของทางเดินอาหาร (ระบบย่อยอาหาร) ในแมวมีความเกี่ยวข้องอย่างใกล้ชิดกับพยากรณ์โรคตามภูมิคุ้มกันฟีโนไทป์ (เซลล์ T/B) ตามรายงานในตำรา ไลมาโฟมาเซลล์ขนาดเล็กที่เกิดขึ้นในลำไส้เล็กของแมวมักเป็นสายเซลล์ T และไลมาโฟมาเซลล์ T ของลำไส้เล็กมีพยากรณ์ระยะยาวที่ดีกว่าเนื้องอกเซลล์ B นอกจากนี้ตำแหน่งที่เกิดเนื้องอกอาจเป็นเบาะแสในการพยากรณ์ภูมิคุ้มกันฟีโนไทป์และพยากรณ์โรคได้ ดังนั้นแม้จะเป็นไลมาโฟมาเดียวกันในแมว แนวทางการรักษาและพยากรณ์โรคก็แตกต่างกันตามภูมิคุ้มกันฟีโนไทป์ จึงสำคัญที่ต้องระบุให้ชัดเจนว่าเป็นเซลล์ T หรือเซลล์ B ผ่านการตรวจ IHC เมื่อส่งตรวจควรตรวจสอบล่วงหน้ากับสัตวแพทย์เจ้าของไข้ว่าใช้แผงเครื่องหมายใดในการอ่านผล

สัตวแพทย์ผู้ตรวจสอบคอนเทนต์นี้

Dr. Tony — Punnawat Phongkittirak

สัตวแพทย์

สัตวแพทย์ผู้สำเร็จการศึกษาด้านสัตวแพทยศาสตร์จากมหาวิทยาลัยขอนแก่น ประเทศไทย และผ่านหลักสูตร IVSA ที่ North Carolina State University สหรัฐอเมริกา ด้วยประสบการณ์ทางคลินิกในโรงพยาบาลสัตว์ ปัจจุบันทำงานในสายงานเฮลท์แคร์สัตว์เลี้ยง และมุ่งมั่นสร้างระบบการดูแลดิจิทัลที่เชื่อมผู้เลี้ยงกับสัตวแพทย์

คำถามที่พบบ่อย

จำเป็นต้องทำการตรวจ IHC หรือไม่? การตรวจชิ้นเนื้อทั่วไปไม่พอหรือ?

หากการวินิจฉัยชัดเจนจากการตรวจชิ้นเนื้อทั่วไป สามารถเริ่มการรักษาได้โดยไม่ต้องใช้ IHC แต่หากสับสนเกี่ยวกับชนิดของเนื้องอก จำเป็นต้องกำหนดภูมิคุ้มกันฟีโนไทป์ของมะเร็งต่อมน้ำเหลือง (T/B) หรือต้องคัดกรองผู้เข้ารับการรักษามุ่งเป้า IHC จะถูกแนะนำเพราะสามารถเปลี่ยนแนวทางการรักษาและพยากรณ์โรคได้อย่างมาก่างมาก

ต้องตัดเนื้อเยื่อเพิ่มเติมเพื่อทำการตรวจ IHC หรือไม่?

ส่วนใหญ่ใช้บล็อกพาราฟินที่ตัดมาจากการตรวจชิ้นเนื้อครั้งแรกโดยตรง สามารถส่งตรวจ IHC ได้โดยไม่ต้องมีการผ่าตัดเพิ่มเติม ทำให้เจ้าของและสัตว์เลี้ยงมีภาระน้อยลง อย่างไรก็ตาม หากปริมาณเนื้อเยื่อน้อยเกินไป อาจจำเป็นต้องเก็บตัวอย่างเพิ่มเติม

หากผล IHC ออกมาเป็น 'ลบ' หมายความว่าไม่ใช่เนื้องอกหรือไม่?

ไม่ใช่ 'ลบ' หมายถึง "ไม่มีโปรตีนที่ตรงกับเครื่องหมายนั้น" เท่านั้น ไม่ได้ปฏิเสธเนื้องอกเอง อาจเป็นบวกในเครื่องหมายอื่น และผลลบเองก็ถูกใช้เพื่อตัดการวินิจฉัยเนื้องอกบางชนิด

ใช้เวลานานเกินไปในการรับผล ต้องเลื่อนการรักษาออกไปหรือไม่?

ในกรณีฉุกเฉิน สามารถเริ่มการรักษาเบื้องต้นด้วยผลจากการตรวจชิ้นเนื้อทั่วไป และปรับแผนการรักษาเมื่อผล IHC ออกมา ต้องตัดสินใจกับสัตวแพทย์เจ้าของไข้ว่า "จะรอหรือเริ่มก่อน" โดยปรับตามชนิดของเนื้องอกและสภาพของสัตว์เลี้ยง

ผล IHC อาจแตกต่างกันไปตามคลินิกสัตว์หรือไม่?

อาจเกิดความแตกต่างเล็กน้อยตามสถาบันตรวจ ชนิดของแอนติบอดี และเกณฑ์การอ่านผล หากสงสัยในผล สามารถส่งสไลด์เดิมไปยังสถาบันพยาธิวิทยาอื่นเพื่อขอความเห็นครั้งที่สอง (2nd opinion) ได้

แชร์